1、样品处理:根据所检测的病原体不同,样品处理方式也不同。比如对于血清样品,需要离心去除细胞和蛋白质;对于组织样品,需要通过机械或化学方法裂解组织细胞,释放出核酸。处理后将样品转移到无菌离心管中。
2、提取核酸:使用核酸提取试剂盒进行核酸提取。具体操作可参考试剂盒说明书,通常包括加入试剂、离心、洗涤、洗脱等步骤。注意,提取过程一定要注意无菌操作。
3、准备反应体系:根据说明书配制反应物质,通常包括LAMP试剂、DNA聚合酶、降温结构域(Bst酶)和特异性引物等。将反应物混合均匀,并添加到空白管中作为阴性对照。
4、添加样品:从得到的样品中取适量加入反应管中。注意,不同样品需要不同的取样量,通常为10-20μl。
5、混匀:轻轻振动或翻转试管,确保反应物和样品充分混合。
6、放入放大仪:将反应管放入放大仪中进行LAMP扩增反应。LAMP反应需要在等温条件下进行,通常为60-65℃。反应时间根据不同试剂盒和样品可能会有所不同,一般为30-60分钟。
7、判断结果:利用放大仪或其他设备观察反应管内是否出现荧光信号。若出现荧光信号,则表示所检测的样品中存在目标病原体核酸序列;否则,表示不存在。同时,还可以通过提供的质控线判断试剂盒反应是否成功。
LAMP鉴定试剂盒
http://www.fsbio-e.com/SonList-1986113.html
https://www.chem17.com/st391834/erlist_1986113.html